志賀氏菌該怎么檢驗
志賀氏菌屬細菌能釋放強烈的內毒素，是引起人體全身反應的因素，造成的感染是我國夏秋季常見的以腹瀉為主的急性腸道傳染病。在環境衛生及衛生習慣不良的情況下，并易于流行。
那么到底什么是志賀氏菌呢？我們又能夠怎么去檢驗食品中的志賀氏菌？
什么是志賀氏菌
志賀氏菌（Shigella Castellani）是一類革蘭陰性短小桿菌，是人類細菌性痢疾最為常見的病原菌，由于不干凈的水源、食物等，主要流行于發展中國家，通稱痢疾桿菌，耐寒，能在普通瓊脂培養基上經過24小時生長，形成直徑達2mm大小、半透明的光滑型菌落。
在腸道桿菌選擇性培養基上形成無色菌落。大小為0.5～0.7×2～3μm，無芽胞，無莢膜，無鞭毛，多數有菌毛。革蘭氏陰性桿菌，是人和靈長類動物的腸道致病菌，引起細菌性痢疾。
（▲志賀氏菌顯色培養基）
檢驗步驟方法
培養基與試劑
志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素、糖發酵管、蛋白胨水、靛基質試劑、志賀氏菌屬診斷血清、API生化鑒定試劑盒
麥康凱（MAC）瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（XLD）瓊脂、志賀氏菌顯色培養基、三糖鐵（TSI）瓊脂、營養瓊脂斜面、半固體瓊脂、葡萄糖銨培養基、尿素瓊脂、β-半乳糖苷酶培養基、氨基酸脫羧酶試驗培養基、西蒙氏檸檬酸鹽培養基、粘液酸鹽培養基
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檢驗流程
詳細步驟
第 1 步
增菌
以無菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質杯，用旋轉刀片式均質器，8000r/min～10000r/min均質；或加入裝有225 mL志賀氏菌增菌肉湯的均質袋中，用拍擊式均質器連續均質1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±1℃，厭氧培養16h～20h。
第 2 步
分離
取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養基平板上，于36℃±1℃培養20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態。宋內氏志賀氏菌的單個菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續培養至48h再進行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見下表1。
第 3 步
初步生化試驗
自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營養瓊脂斜面各一管，置36℃±1℃培養20h～24h，分別觀察結果。
凡是三糖鐵瓊脂中斜面產堿、底層產酸（發酵葡萄糖，不發酵乳糖，蔗糖）、不產氣（福氏志賀氏菌6型可產生少量氣體）、不產硫化氫、半固體管中無動力的菌株，挑取已培養的營養瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗和血清學分型。
第 4 步
生化試驗
用已培養的營養瓊脂斜面上生長的菌苔，進行生化試驗，即β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗。生化反應不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。
志賀氏菌屬生化特性見下表2。
注意 由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時還需加做靛基質、甘露醇、棉子糖、甘油試驗，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗，應為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。
附加生化試驗
由于某些不活潑的大腸埃希氏菌、A-D菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發生凝集；因此前面生化實驗符合志賀氏菌屬生化特性的培養物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗（36℃培養24h～48h）。
志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D菌的生化特性區別見下表3。
第 5 步
血清學鑒定
志賀氏菌屬沒有動力，所以沒有鞭毛抗原。志賀氏菌屬主要有菌體（O）抗原。菌體O抗原又可分為型和群的特異性抗原。一般采用1.2%～1.5%瓊脂培養物作為玻片凝集試驗用的抗原。
1、在玻片上劃出2個約1cm×2cm的區域，挑取一環待測菌，各放1/2環于玻片上的每一區域上部，在其中一個區域下部加1 滴抗血清，在另一區域下部加入1滴生理鹽水，作為對照。再用無菌的接種環或針分別將兩個區域內的菌落研成乳狀液。
2、將玻片傾斜搖動混合1min，并對著黑色背景進行觀察，如果抗血清中出現凝結成塊的顆粒，而且生理鹽水中沒有發生自凝現象，那么凝集反應為陽性。如果生理鹽水中出現凝集，視作為自凝。這時，應挑取同一培養基上的其他菌落繼續進行試驗。
注意 如果待測菌的生化特征符合志賀氏菌屬生化特征，而其血清學試驗為陰性的話，則挑取菌苔于1mL生理鹽水做成濃菌液，100℃煮沸15min～60min去除K抗原后再檢查。
第 6 步
結果報告
綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果，報告25g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。
文 | 參考《GB 4789.5-2012 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗》
圖 | 來源網絡